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  2. 產品中心
  3. 非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑

  4. 產品名稱:非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑
  5. 所屬分類:產品中心
  6. 聯系人:銷售部
  7. 電話: 營銷熱線 17736517591 (同微信)總機:0315-3190271
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    通用名稱:非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒(熒光探針法,免提?。?/p>

    【主要成分】

    圖片1

    【作用與用途】

    本試劑盒用于定性檢測非洲豬瘟病毒(Africanswine fever virus,ASFV)特異性核酸片段,為臨床監測和診斷非洲豬瘟病毒感染豬提供檢測數據。非洲豬瘟確診應根據臨床癥狀,流行病學及實驗室檢測結果進行綜合判定。

    【檢測原理】

    本試劑盒以PCR方法結合熒光探針,核酸提取與純化同步操作,直接通過實時監測PCR擴增產物的累積過程中熒光信號的變化對非洲豬瘟病毒(African swinefevervirus,ASFV)的特異性核酸片段進行檢測。

    【用法】

    1.適用樣本類型本試劑盒適用于豬口鼻眼拭子、組織和血液或血清等樣本中非洲豬瘟病毒的核酸檢測。

    2.樣本采集

    2.1口鼻眼拭子樣本的采集:

    采集患病豬口鼻眼拭子樣本,用專用采樣棉簽,適度拭抹口腔分泌物和鼻腔分泌物,眼分泌物要用拭子在眼瞼下充分擦拭,迅速將棉簽放入裝有400μL樣本稀釋液的采樣管中,在靠近頂端處折斷棉簽桿,旋緊管蓋并密封,以防干燥。拭子采樣以溶解到樣本稀釋液中可以看到組織懸浮物為最佳。

    2.2組織樣本的采集:

    無菌采集病豬組織樣本約0.1g,置于1.5mL無菌離心管中。

    2.3全血樣本的采集:

    抽取豬靜脈血1mL,置于含有適量抗凝劑的采血管中(抗凝劑建議采用EDTA或檸檬酸三鈉,不應采用肝素);

    2.4血清樣本的采集:

    抽取豬靜脈血1mL,注入無菌收集管中,室溫不超過4小時(約30-60分鐘),待樣本自行析出血清,或直接1600rpm離心5分鐘分離出血清,轉移至新的滅菌離心管中備用。

    3.保存

    采集的待測樣本可立即用于檢測,待測樣本在2~8℃保存不應超過三天;-20±5℃保存不超過一個月;-70℃以下可以長期保存。應避免反復凍融。

    【操作程序】

    1.擴增試劑準備

    從試劑盒中取出ASFV-PCR反應液、ASFV-陰性對照品和ASFV-陽性對照品,待所有組分完全溶解后,振蕩混勻5秒,瞬時離心5秒。

    2.樣本處理

    2.1口鼻眼拭子樣本處理:

    無需樣本處理,即可直接上樣。

    2.2組織樣本處理:

    取約黃豆粒大小組織樣本(約0.1g)置于無菌1.5mL離心管中,加入200μL樣本稀釋液,使用手持式組織研磨儀充分研磨至勻漿。另取出一個新的無菌1.5mL離心管,加入30μL組織樣本裂解液,再加入30μL組織勻漿液,渦旋混勻,置于95℃加熱5min后,12000rpm離心2min,吸取上清液5μL上樣。

    2.3血液樣本處理:

    全血樣本處理:經樣本稀釋液稀釋10倍后,即可直接上樣;

    血清樣本處理:經樣本稀釋液稀釋5倍后,即可直接上樣。

    3. 加樣

    按下表體系,在0.2mLPCR管中配制反應液。試劑用畢后將剩余試劑立即放入-20±5℃保存。


    圖片2


    3.1在一個分裝有反應液的PCR反應管中加入5μL的ASFV-陰性對照品;

    3.2將步驟2.樣本處理中取得的待檢樣本充分震蕩混勻,然后按照5μL/樣本分別加入分裝有反應液的PCR反應管中;

    3.3在最后一個分裝有反應液的PCR反應管中加入5μL的ASFV-陽性對照品;

    以上操作建議在冰浴條件下進行,操作完畢壓緊管蓋,瞬時離心。

    注:使用卡尤迪生物科技Mini8全系列熒光定量PCR儀時,建議使用無色透明的0.2mLPCR管,切勿使用有顏色,磨砂的PCR管,因為該儀器熒光讀取方式為側面激發和收集熒光信號。

    4. PCR擴增

    將反應管放置到PCR檢測儀內,記錄加樣順序。

    4.1按下表設置反應條件

    圖片3

    4.2熒光通道的選擇

    請選擇FAM通道檢測ASFV的核酸。

    【判定】

    1.試驗成立條件:

    1.1陰性對照品FAM檢測通道無S型擴增曲線;

    1.2陽性對照品FAM檢測通道有典型S型擴增曲線且Ct值≤23;

    1.3陰、陽性對照品檢測符合上述結果,則實驗有效。

    2.結果判定

    2.1如果樣本在FAM 通道有典型S型擴增曲線且Ct值≤23,則判定為非洲豬瘟病毒核酸檢測陽性;

    2.2如果FAM通道有典型S型擴增曲線且 Ct值在23-30之間,則需要復檢。復檢結果如果樣本FAM 通道仍有典型S型擴增曲線且Ct值≤30,則判定為非洲豬瘟病毒核酸檢測陽性,否則為陰性。

    【注意事項】

    1.開始檢測前請仔細閱讀本說明書,按要求操作。

    2.各區物品均為專用,不得交叉使用,避免污染;實驗后立即清潔工作臺。

    3.擴增產物的污染,很容易出現假陽性結果。因此,臨床實驗室應嚴格按照《臨床基因擴增實驗室工作規范》配備設備及操作人員。

    4.本試劑盒檢測結果僅供科研使用,對病豬的臨床診治應結合其癥狀/體征,病史,其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。

    5. 檢測為陰性,并不代表為非感染狀態,具體診斷結果須結合其他臨床診斷結果判斷。造成檢測為陰性的可能是:①不合理樣本采集、轉運及處理、樣本中病毒濃度過低,②未經驗證的其他干擾因素如:服用抗病毒藥物等。

    6.樣本中DNA濃度低于本產品的最低檢出限時可能出現假陰性。

    7.核酸反應液分裝時應盡量避免產生氣泡,上機前注意檢查各熒光定量PCR反應管是否蓋緊,以免熒光物質泄漏污染儀器。

    【儲存與有效期】

    本試劑盒中樣本裂解液和樣本稀釋液應儲存于 2~8℃;其余組份應儲存于-20±5℃的避光條件,有效期為12個月,盡量避免反復凍融。


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